每一个实验室分析人员都应该熟练掌握并应用HPLC



，对于一些常见的故障分析应该做到游刃有余


，才能在运行故障的时候即使解决问题
，提高工作效率。

以下是HPLC几个常见问题及对策



：

（1）保留时间发生漂移：

①度控制不好
，解决方法是采用恒温装置
，保持柱温恒定


；
②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发
、反应等

；
③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡
。

（2）出现拖尾或双峰
：
①筛板堵塞或柱失效
，解决办法是反向冲洗柱子
，替换筛板或更换柱子；
②存在干扰峰
，解决办法为使用较长的柱子


；改换流动相或更换选择性好的柱子；
③可能柱超载

，减少进样量
。

（3）做HPLC分析时，柱压不稳定

：
①泵内有空气
，解决的办法是清除泵内空气
，对溶剂进行脱气处理
；
②比例阀失效，更换比例阀即可

；
③泵密封垫损坏
，更换密封垫即可；
④溶剂中的气泡
，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法



；
⑤系统检漏
，找出漏点
，密封即可

；
⑥梯度洗脱
，这时压力波动是正常的。

（4）基线漂移原因、解决方法
1)原因分析
①柱温波动
。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器

、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器
。）
②流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）
③流通池被污染或有气体
④检测器出口阻塞
。（高压造成流通池窗口破裂
，产生噪音基线）
⑤流动相配比不当或流速变化
⑥柱平衡慢，特别是流动相发生变化时
⑦流动相污染
、变质或由低品质溶剂配成
⑧样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰
样被洗脱出

，从而表现出一个逐步升高的基线

。
⑨使用循环溶剂


，不提倡
。未调整检测器




。
⑩检测器没有设定在最大吸收波长处

。
2)解决方法 
①控制好柱子和流动相的温度
，在检测器之前使用热交换器
②使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用在线脱气或氦气脱气。
③用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池



。

④取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗



。
⑤更改配比或流速
。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速



。
⑥用中等强度的溶剂进行冲洗
，更改流动相时


，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。使用离子对试剂
、缓冲盐更应注意平衡柱
。
⑦检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂⑧改变分析条件
。使用保护柱




，如有必要
，在进样之间或在分析过程中


，定期用强溶剂冲洗柱子。
⑨重新设定基线


。使用新的流动相
。
⑩将波长调整至最大吸收波长处

。重选检测波长

。